DNA序列測定分手工測序和自動(dòng)測序，手工測序包括sanger雙脫氧鏈終止法和maxam-gilbert化學(xué)降解法。自動(dòng)化測序?qū)嶋H上已成為當(dāng)今 dna序列分析的主流。美國pe abi公司已生產(chǎn)出373型、377型、310型、3700和3100型等dna測序儀，其中310型是臨床檢測實(shí)驗(yàn)室中使用*多的一種型號。 1．bigdye測序反應(yīng)試劑盒 主要試劑是bigdye mix，內(nèi)含pe**四色熒光標(biāo)記的ddntp和普通dntp，amplitaq dna polymerase fs，反應(yīng)緩沖液等。
2．pgem-3zf (+) 雙鏈dna對照模板 0.2g/l，試劑盒配套試劑。
3．m13(-21)引物 tgtaaaacgacggccagt，3.2μmol/l，即3.2pmol/μl，試劑盒配套試劑。
4．dna測序模板 可以是pcr產(chǎn)物、單鏈dna和質(zhì)粒dna等。模板濃度應(yīng)調(diào)整在pcr反應(yīng)時(shí)取量1μl為宜。本實(shí)驗(yàn)測定的質(zhì)粒dna，濃度為0.2g/l，即200ng/μl。
5．引物 需根據(jù)所要測定的dn**段設(shè)計(jì)正向或反向引物，配制成3.2μmol/l，即3.2pmol/μl。如重組質(zhì)粒中含通用引物序列也可用通用引物，如m13(-21)引物，t7引物等。
6．**去離子水或三蒸水。
7．0.2ml或和0.5ml的pcr管 蓋體分離，pe公司產(chǎn)品。
8．3mol/l 醋酸鈉(ph5.2) 稱取40.8g naac·3h2o溶于70ml蒸餾水中，冰醋酸調(diào)ph至5.2，定容至100ml，高壓**后分裝。
9．70%乙醇和無水乙醇。
10．naac/乙醇混合液 取37.5ml無水乙醇和2.5ml 3mol/l naac混勻，室溫可保存1年。
11．pop 6測序膠 abi產(chǎn)品。
12．模板抑制試劑(tsr) abi產(chǎn)品。
13．10×電泳緩沖液 abi產(chǎn)品。
14．a(chǎn)bi prism 310型全自動(dòng)dna測序儀。
15．2400型或9600型pcr儀。
16．臺(tái)式冷凍高速離心機(jī)。
17．臺(tái)式高速離心機(jī)或袖珍離心機(jī)。
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